聚丙烯酰胺等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質(zhì)具有不同等電點的特性，以聚丙烯酰胺為電泳支持物，在其中加入載體兩性電解質(zhì)（一種含有各種連續(xù)pI的小分子混合物）的電泳分離技術(shù)。載體兩性電解質(zhì)是一系列多氨基多羧基的混合物，pI = 3～11。在制備聚丙烯酰胺凝膠時，將其混溶其中。

在沒有電場時，載體兩性電解質(zhì)的pH值是該溶液pH范圍的平均值，所有載體兩性電解質(zhì)分子都荷電。

當(dāng)引入電場時，載體兩性電解質(zhì)分子向陰極或陽極遷移，帶有最低等電點的分子（荷最多負(fù)電）最快地向陽極移動，當(dāng)它達到凈電荷為零的位置時才停止。這個位置靠近陽極，由于它具有高的緩沖能力，使環(huán)境溶液的pH等于分子本身的pI。一些低pI的載體兩性電解質(zhì)（荷其次多的負(fù)電）也向陽極移動，直到它的凈電荷減少到零時才停止。同樣，其周圍環(huán)境溶液的pH值也等于它本身的pI。依次類推，所有載體兩性電解質(zhì)分子將分別在陽極和陰極之間到達它們自己的位置，從而形成pH梯度。

載體兩性電解質(zhì)在電場作用下，按各自pI形成從陽極到陰極逐漸增加的平滑和連續(xù)的pH梯度，蛋白質(zhì)在此pH梯度凝膠中泳動，當(dāng)遷移至pH值等于pI處時不再泳動，被濃縮成狹窄的區(qū)帶。

   

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