高效液相色譜儀在進(jìn)行多成分的復(fù)雜樣品分離時，經(jīng)常會碰到前面的一些成分分離不完全，后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰形較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內(nèi)全部洗脫并相互分離，往往要用到梯度洗脫技術(shù)。

一、工作原理：

流動相由兩種（或多種）不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例而改變流動相的極性、PH值和離子強(qiáng)度，使每個流出的組分都有合適的容量因子，并使樣品的所有組分在最短時間內(nèi)實(shí)現(xiàn)最佳分離。

二、類型：

1、低壓梯度：

只需一臺高壓輸液泵，比例閥在泵之前，溶液在常壓（低壓）下混合。

簡單，經(jīng)濟(jì)，只需一個泵，所用溶劑的元數(shù)沒有限制。

2、高壓梯度：

采用兩臺高壓輸液泵，分別按設(shè)定的比例各輸送一種溶液至混合器，混合器在泵之后，兩種溶液在高壓狀態(tài)下混合。

流量精度高，溶劑的可壓縮性和熱力學(xué)體積的變化可能影響輸入色譜柱中溶劑的組成。

三、實(shí)現(xiàn)方式：

對于復(fù)雜樣品，線性梯度是最好的。

正相色譜中，常用二氯甲烷加入正己烷來實(shí)現(xiàn)。

反相色譜中，乙腈、甲醇加入水中是最常用的。

四、特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

分離復(fù)雜混合物，使所有組分都處在最佳的k值范圍內(nèi)。

2、缺點(diǎn)：

檢測器的使用受到限制，分析結(jié)果的重復(fù)性取決于流速的穩(wěn)定性，色譜柱需進(jìn)行再生處理。

   

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