高效毛細(xì)管電泳色譜儀(CE)是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,利用帶電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離,是分析科學(xué)繼高效液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展,使分析科學(xué)從微升級(jí)進(jìn)入到了納升級(jí)水平,不僅使單細(xì)胞乃至單分子分析成為可能,也使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子分析有了新的轉(zhuǎn)機(jī)。CE的毛細(xì)管極細(xì),分離效能很高,但同時(shí)對(duì)樣品組分的檢測(cè)帶來(lái)了困難,對(duì)檢測(cè)技術(shù)的要求較高。如何增加檢測(cè)器的靈敏度,又不造成明顯的區(qū)帶展寬,一直是CE技術(shù)發(fā)展中的一個(gè)至關(guān)重要的問(wèn)題。迄今為止,已有許多檢測(cè)技術(shù)與CE聯(lián)用,在不同領(lǐng)域中發(fā)揮作用。
一、紫外可見(jiàn)光吸收檢測(cè):
紫外可見(jiàn)光吸收是CE中應(yīng)用最廣泛的一種檢測(cè)方法。石英毛細(xì)管可透過(guò)20nm波長(zhǎng)以下的紫外光,允許從紫外光到可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)樣品組分進(jìn)行檢測(cè)。而且由于透光窗口直接開(kāi)在毛細(xì)管上(柱上檢測(cè)),檢測(cè)器本身不存在死體積和因此而造成的組分區(qū)帶展寬現(xiàn)象。事實(shí)上樣品組分的分離在檢測(cè)窗口處仍在進(jìn)行。為了獲得高效,檢測(cè)區(qū)的寬度應(yīng)小于樣品組分的區(qū)帶寬度,也就是說(shuō)透光窗口應(yīng)足夠小。毛細(xì)管電泳峰寬一般為2~5mm,透光窗口的尺寸應(yīng)控制在上述峰寬的1/3以內(nèi)。紫外可見(jiàn)光吸收檢測(cè)的主要缺點(diǎn)是靈敏度不高,這主要是光程太短所致。
二、熒光檢測(cè):
熒光檢測(cè)也是CE中一種常見(jiàn)的柱上檢測(cè)方法,因組分區(qū)帶小,不會(huì)引起額外展寬,而且檢測(cè)靈敏度很高。尤其是激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)(LIF),其靈敏度可高達(dá)10ˉ12~10ˉ16mol/L,是目前CE中最靈敏的一種檢測(cè)方法。熒光檢測(cè)器的缺點(diǎn)是僅能用于有天然熒光和易于用熒光試劑標(biāo)記或染色的物質(zhì)的檢測(cè),價(jià)格較高。但由于LIF的高靈敏度和高選擇性,仍是CE中不可缺少的檢測(cè)方法。
三、電化學(xué)檢測(cè):
電化學(xué)檢測(cè)可避免光學(xué)類檢測(cè)器遇到的光程太短的問(wèn)題,對(duì)電活性組分的檢測(cè)具有靈敏度高、線性范圍寬、選擇性好和價(jià)格低等特點(diǎn)。安培檢測(cè)是三種電化學(xué)檢測(cè)模式(電導(dǎo)檢測(cè)、電位檢測(cè)和安培檢測(cè))中最易實(shí)現(xiàn)、應(yīng)用較廣的一種檢測(cè)技術(shù),為微體積環(huán)境中電活性物質(zhì)的測(cè)定提供了高靈敏度的檢測(cè)方法。但安培檢測(cè)要求被檢測(cè)物質(zhì)必須具有良好的電化學(xué)活性,因而檢測(cè)范圍有一定的局限性。
四、質(zhì)譜檢測(cè):
質(zhì)譜檢測(cè)(MS)具有較強(qiáng)的定性功能,在一次分析中可獲得很多結(jié)構(gòu)信息,將CE與MS相結(jié)合是分離科學(xué)中的一項(xiàng)突破性進(jìn)展。
1、CE-MS聯(lián)用的關(guān)鍵是接口。
2、CE-MS聯(lián)用有著很強(qiáng)的生命力,但尚存在以下缺點(diǎn):
(1)濃度靈敏度低,不如LC-MS。
(2)不是所有的CE分離模式都可方便地與MS聯(lián)用。
(3)MS對(duì)CE分離緩沖液的限制較多。
3、CE-MS聯(lián)用有以下難點(diǎn)需進(jìn)一步改善:
(1)如何將被分析物的分子或離子經(jīng)由CE分離后的液態(tài)最終傳至高真空的MS中。
(2)接口處的體積范圍怎樣才能與CE的峰體積兼容。
(3)分離電解質(zhì)的成分怎樣才能與質(zhì)譜的需求兼容。
(4)在聯(lián)機(jī)模式下如何將CE流出物以在線方式有效地傳到MS中而不丟失分離效率。
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