高效毛細(xì)管電泳色譜儀(CE)紫外檢測(cè)器是基于物質(zhì)對(duì)紫外吸收進(jìn)行檢測(cè),是最成熟的檢測(cè)器,在CE中應(yīng)用最廣。
一、工作原理:
入射紫外光通過(guò)樣品時(shí),被吸收的多少符合朗伯-比耳定律。
檢測(cè)點(diǎn)在毛細(xì)管的末端,檢測(cè)點(diǎn)的毛細(xì)管的外涂層要燒掉。
二、檢測(cè)方法:
1、固定波長(zhǎng):
光源為低紫外氘燈,用濾光片獲得固定波長(zhǎng)的光。
2、可變波長(zhǎng):
光源為氘燈或鎢燈,用單色器(棱鏡或光柵)獲得連續(xù)可調(diào)波長(zhǎng)的光。
3、快速掃描:
(1)利用線性二極管陣列快速捕獲紫外光。
(2)利用硅光電倍增管作快速掃描。
4、間接測(cè)定:
紫外間接測(cè)定是在緩沖液中加入有紫外吸收的添加劑,溶質(zhì)因無(wú)紫外吸收而產(chǎn)生倒峰。
可解決許多直接檢測(cè)所不能解決的問(wèn)題,主要用于離子分析。
三、特點(diǎn):
1、通用性好,特別是對(duì)蛋白質(zhì)的適用性很強(qiáng)。
2、靈敏度不足。
四、提高靈敏度的方法:
由于CE檢測(cè)池的光路長(zhǎng)度為毛細(xì)管內(nèi)徑,一般不超過(guò)100μm,小內(nèi)徑的毛細(xì)管限制了紫外檢測(cè)器的靈敏度,可采用以下幾種方法來(lái)提高靈敏度。
1、優(yōu)化測(cè)定波長(zhǎng):
通過(guò)測(cè)定不同波長(zhǎng)下的信噪比來(lái)選擇最優(yōu)測(cè)定波長(zhǎng),以提高靈敏度。
2、減少檢測(cè)噪音:
(1)提高光源強(qiáng)度。
(2)采用聚焦和狹縫等減少背景光的影響。
(3)采用良好的信號(hào)放大系統(tǒng)。
3、擴(kuò)展吸光光路長(zhǎng)度:
(1)為了克服圓柱形毛細(xì)管表面引起的散射、失真等不利的光學(xué)特性和增加光路長(zhǎng)度,可采用矩形、扁形、Z形和泡型等特殊毛細(xì)管。當(dāng)然柱效會(huì)有所下降。
(2)對(duì)于普通毛細(xì)管,可采用軸向照射和多次反射來(lái)增加光路長(zhǎng)度。
1)軸向照射:將激光光束從毛細(xì)管末端沿管軸方向入射,在毛細(xì)管側(cè)面進(jìn)行檢測(cè)。
2)多次反射:在毛細(xì)管壁鍍上銀,分別開(kāi)入射窗和出射窗。當(dāng)入射光以特定角度入射后,在毛細(xì)管內(nèi)反射30~40次后從出射窗口射出。
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