高效液相色譜儀色譜柱固定相填料有硅膠、多孔聚合物和無機填料等。
一、硅膠特點:
大多數(shù)HPLC色譜柱使用硅膠微粒作載體。
1、機械強度高,使柱反壓較低。
2、表面通過化學(xué)改性(修飾),可形成具有不同官能團的鍵合相。
3、更換溶劑時填料大小不會變化。
4、在高pH值時會溶解。
5、表面呈酸性。
6、純度不高的酸性硅膠(A型硅膠)可分離中性和非電離的化合物。
7、高純度弱酸性硅膠(B型硅膠)可分離對離子和可電離的化合物,尤其是堿性化合物分離較好。
二、多孔聚合物特點:
反相HPLC色譜柱的大多數(shù)聚合物微粒由苯乙烯和二乙烯基苯交聯(lián)而成。
1、pH = 1~13均可用。
2、疏水保留性很強。
3、大孔的多孔聚合物對蛋白質(zhì)樣品的分離非常有用。
4、強保留的品可用0.1M的氫氧化鈉從柱中洗脫。
5、柱效低。
6、在不同的有機改性劑中溶脹程度不同。
三、無機填料特點:
無機填料有石墨碳、氧化鋁和氧化鋯等。
1、石墨碳:
(1)保留強,用于分離在C18柱上保留較小的化合物。
(2)不會被流動相溶解,可用于任何pH值,適用溫度范圍寬。
(3)柱效低,極易碎裂。
2、氧化鋁:
(1)剛性強,可制成穩(wěn)定的柱床。
(2)未改性的氧化鋁在正相條件下可分離弱極性化合物。
(3)可在pH值高達12的流動相中使用。
(4)不能用于羧酸樣品的分離。
3、氧化鋯:
(1)聚合物涂層的多孔氧化鋯微粒柱可用于所有已知的HPLC洗脫劑。
(2)pH范圍為1~14。
(3)可用于溫度100℃。
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