高效毛細(xì)管電泳色譜儀簡稱毛細(xì)管電泳儀(CE),是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場為驅(qū)動(dòng)力,利用帶電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離,是分析科學(xué)繼高效液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展,使分析科學(xué)從微升級進(jìn)入到了納升級水平,不僅使單細(xì)胞乃至單分子分析成為可能,也使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子分析有了新的轉(zhuǎn)機(jī)。
CE分離模式有毛細(xì)管區(qū)帶電泳、毛細(xì)管膠束電泳色譜、毛細(xì)管凝膠電泳、毛細(xì)管等電聚焦電泳、毛細(xì)管等速電泳和毛細(xì)管陣列電泳等。
一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE):
CZE又稱毛細(xì)管自由電泳,由于操作簡單、多樣化,是目前CE中最基本、應(yīng)用最廣泛的一種分離模式。
在CZE中,毛細(xì)管內(nèi)只充入緩沖溶液,在直流高壓驅(qū)動(dòng)下.溶質(zhì)以不同的速度在分立的區(qū)帶內(nèi)進(jìn)行遷移而被分離,由于電滲流的存在,正負(fù)離子都可用CZE分離,而中性分子本身在電場中不移動(dòng),隨電滲流一起流出毛細(xì)管。
CZE的應(yīng)用范圍很寬,可分離氨基酸、多肽、離子和對映體等。
二、毛細(xì)管膠束電泳色譜(MECC):
在MECC中,把一些離子型表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉)加到緩沖液中,當(dāng)其濃度超過臨界膠束濃度后,形成有一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠柬。溶質(zhì)在水相和膠束相(準(zhǔn)固定相)之間產(chǎn)生分配,中性粒子因其本身疏水性不同,在兩相中分配存在差異而得以分離。MECC使CE能用于中性物質(zhì)的分離,拓寬了CE的應(yīng)用范圍,是對CE的極大貢獻(xiàn)。
三、毛細(xì)管凝膠電泳(CGE):
CGE是將平板上的凝膠移到毛細(xì)管中作支持物而進(jìn)行的電泳,凝膠具有多孔性,起類似分子篩的作用,溶質(zhì)按分子大小進(jìn)行分離。凝膠能減小溶質(zhì)的擴(kuò)散,峰型尖銳,能達(dá)到CE中的最高柱效。常用聚丙烯酰胺在毛細(xì)管內(nèi)交聯(lián)制成凝膠柱,可分離測定蛋白質(zhì)和DNA等,但柱制備比較困難,使用壽命短。
四、毛細(xì)管等電聚焦電泳(CIEF):
CIEF是將傳統(tǒng)聚焦電泳轉(zhuǎn)移到毛細(xì)管中進(jìn)行,通過管壁涂層使電滲流減小到最小,以防止蛋白質(zhì)吸附和破壞穩(wěn)定的聚焦區(qū)帶。在高壓作用下,毛細(xì)管內(nèi)部建立pH梯度,蛋白質(zhì)在毛細(xì)管中向各自的等電點(diǎn)聚焦,形成明顯的區(qū)帶。
五、毛細(xì)管等速電泳(CITP):
CITP是一種較早的分離模式,采用先導(dǎo)電解質(zhì)和后繼電解質(zhì),使溶質(zhì)按其電泳淌度不同得以分離,常用于分離離子型物質(zhì)。但要采用不連續(xù)緩沖液,分辨率差,目前應(yīng)用不多。
六、毛細(xì)管陣列電泳(CAE):
為了滿足大批量樣品的分離要求,特別是在人類基因組和蛋白組計(jì)劃中的應(yīng)用,CAE漸漸呈現(xiàn)出了廣闊的應(yīng)用發(fā)展前景和趨勢。與傳統(tǒng)聚丙烯酰胺凝膠板電泳可進(jìn)行多道平行分析相似,CAE是采用多根毛細(xì)管組成的陣列進(jìn)行多道分析。
來源:http://www.fudizao.com