高效毛細管電泳色譜儀電泳淌度又稱電泳遷移率,是指帶電顆粒在高效毛細管電泳儀毛細管中單位電場下的泳動速度。影響電泳遷移率的因素有內在因素和外界因素。
一、影響電泳遷移率的內在因素:
1、顆粒所帶凈電荷量:
顆粒遷移率與顆粒所帶凈電荷量成正比。
2、顆粒大小和形狀:
顆粒直徑小而接近于球形,在電場中泳動速度快。
3、DNA構象:
一般遷移率為超螺旋環(huán)狀DNA>線狀DNA>單鏈開環(huán)DNA。
二、影響電泳遷移率的外界因素:
1、電場強度:
一般來說,電場強度越高,帶電顆粒移動速度越快。
2、溶液pH:
溶液pH決定被分離物的解離程度和質點的帶電性質及所帶凈電荷量。
溶液pH離pl越遠,質點所帶凈電荷越多,電泳遷移率越大。因此,電泳時,應根據樣品性質選擇合適的pH值緩沖液。
3、溶液離子強度:
電泳液中的離子增加,會使電泳遷移率降低。原因是帶電的離子會吸引相反符號的離子聚集在其周圍,形成一個與運動離子符號相反的離子氛,使該離子向相反的方向運動,從而降低該離子的遷移率。
4、溫度:
電泳過程中,由于通電會產生焦耳熱,焦耳熱對電泳有很大的影響。溫度每升高1℃,遷移率增加約2.4%。
為降低熱效應對電泳的影響,可控制電壓、電流和在電泳系統(tǒng)中安裝冷卻散熱裝置。
5、支持物:
支持物的吸附作用要小,否則電場強度不均勻,影響區(qū)帶分離,使實驗結果無法重復。
6、電滲流:
電滲流速度的微小變化會影響分離結果的重現性。
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