高效液相色譜儀色譜柱的主要性能指標(biāo)有柱型、柱選擇性和柱效等。
一、柱型:
目前,高效液相色譜常用標(biāo)準(zhǔn)柱型的柱內(nèi)徑為3.9mm和4.6mm,柱長(zhǎng)為20~25cm,柱流動(dòng)相的體積流速為1mL/min左右,填料顆粒度5~10um,柱效為7000~10000理論塔板數(shù)/m。
色譜柱發(fā)展的趨勢(shì),一方面是減少顆粒度(3~5um),提高柱效,縮短柱長(zhǎng),提高分析速度;另一方面是減小柱內(nèi)徑,節(jié)省溶劑用量,提高檢測(cè)濃度,特別是用于復(fù)雜組分的分析。
二、柱選擇性:
柱選擇性主要指柱固定相對(duì)分離的控制。
固定相對(duì)不同類(lèi)型的化合物有一定的選擇性,一般根據(jù)相似相溶的原則選擇固定相。如果溶質(zhì)溶于烴類(lèi)溶劑,表明它是低極性化合物,可選擇非極性或弱極性固定相。如果樣品溶于極性溶劑如醇類(lèi),可選擇極性固定相或非極性固定相。
在高效液相色譜中,由于每一種分離方法所用固定相的種類(lèi)很少,分離主要靠溶劑的選擇。C18柱能夠用于多種化合物的分離,是最常用的固定相。
三、柱效:
要實(shí)現(xiàn)對(duì)溶質(zhì)的分離,要求色譜柱具有很高的柱效。
影響柱效的因素很多,對(duì)柱效的評(píng)價(jià)比較困難。一般是測(cè)定色譜柱的理論板數(shù)n,n = 16(tr/Wb)2。同時(shí)還要考慮色譜柱的滲透性和峰的對(duì)稱(chēng)性。
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