氨基酸色譜儀是以強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂（磺酸基修飾聚苯乙烯－二乙烯基苯）為固定相，采用柱后茚三酮衍生的高效液相色譜儀。

一、氨基酸在pH = 2.2時(shí)都帶正電荷，在陽離子樹脂上都被吸附，但由于酸堿性、極性和分子大小的差異，吸附強(qiáng)度各不相同。

二、隨著緩沖液的不斷洗脫，氨基酸不斷地吸附和解吸。

三、不同的氨基酸和離子交換樹脂的親和力不同：堿性氨基酸＞芳香族氨基酸＞中性氨基酸＞酸性氨基酸和羥基氨基酸。

四、提高流動(dòng)相pH值，氨基酸正電荷減少，吸附力減弱，最后從離子交換柱上洗脫下來，洗脫順序是酸性和帶羥基氨基酸、中性氨基酸和堿性氨基酸。

五、氨基酸與茚三酮反應(yīng)液在加熱的條件下反應(yīng)（135℃），生成可在570nm和440nm檢測到的藍(lán)紫色物質(zhì)，仲氨酸生成可在440nm檢測到的淺黃色物質(zhì)。

六、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間進(jìn)行定性，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量。

七、氨基酸總量的測定：

1、常規(guī)酸解法：

6N HCl，110℃，24h。

可測定15種氨基酸，除含硫氨基酸和色氨酸外。

2、含硫氨基酸氧化酸解法：

水解前用過甲酸氧化，使胱、半胱氨酸生成磺基丙氨酸，蛋氨酸生成蛋氨酸砜，然后水解測定。

HBr為終止劑，可測定除色氨酸、酪氨酸、組氨酸和苯丙氨酸外的蛋白水解氨基酸（14種）。

偏重亞硫酸鈉（Na₂S₂O₅）為終止劑，可測定除色氨酸和酪氨酸外的蛋白水解氨基酸（16種）。

3、堿解法：

色氨酸，4mol/L NaOH，110℃，20h。

   

來源：http://www.fudizao.com