高效毛細(xì)管電泳色譜儀（CE）是以毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動(dòng)力，利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離。由于CE溶質(zhì)區(qū)帶的超小體積特性導(dǎo)致光程太短，圓柱形毛細(xì)管作為光學(xué)表面不夠理想，對(duì)檢測器靈敏度要求相當(dāng)高。CE檢測器有紫外檢測器、激光誘導(dǎo)熒光檢測器、質(zhì)譜檢測器、電化學(xué)檢測器、激光熱透鏡檢測器、激光誘導(dǎo)毛細(xì)管振動(dòng)檢測器、拉曼光譜檢測器、化學(xué)發(fā)光檢測器、示差折光檢測器和同位素檢測器等。

一、紫外檢測器：

紫外檢測器是基于物質(zhì)對(duì)紫外吸收進(jìn)行檢測，是最成熟的檢測器，在CE中應(yīng)用最廣。

1、原理：

入射紫外光通過樣品時(shí)，被吸收的多少符合朗伯－比耳定律。

檢測點(diǎn)在毛細(xì)管的末端，檢測點(diǎn)的毛細(xì)管的外涂層要燒掉。

2、檢測方法：

（1）固定波長：

光源為低紫外氘燈，用濾光片獲得固定波長的光。

（2）可變波長：

光源為氘燈或鎢燈，用單色器（棱鏡或光柵）獲得連續(xù)可調(diào)波長的光。

（3）快速掃描：

1）利用線性二極管陣列快速捕獲紫外光。

2）利用硅光電倍增管作快速掃描。

（4）間接測定：

紫外間接測定是在緩沖液中加入有紫外吸收的添加劑，溶質(zhì)因無紫外吸收而產(chǎn)生倒峰。

可解決許多直接檢測所不能解決的問題，主要用于離子分析。

3、特點(diǎn)：

（1）通用性好，特別是對(duì)蛋白質(zhì)的適用性很強(qiáng)。

（2）靈敏度不足。

4、提高靈敏度的方法：

由于CE檢測池的光路長度為毛細(xì)管內(nèi)徑，一般不超過100μm，小內(nèi)徑的毛細(xì)管限制了紫外檢測器的靈敏度，可采用以下幾種方法來提高靈敏度。

（1）優(yōu)化測定波長：

通過測定不同波長下的信噪比來選擇最優(yōu)測定波長，以提高靈敏度。

（2）減少檢測噪音：

1）提高光源強(qiáng)度。

2）采用聚焦和狹縫等減少背景光的影響。

3）采用良好的信號(hào)放大系統(tǒng)。

（3）擴(kuò)展吸光光路長度：

1）為了克服圓柱形毛細(xì)管表面引起的散射、失真等不利的光學(xué)特性和增加光路長度，可采用矩形、扁形、Z形和泡型等特殊毛細(xì)管。當(dāng)然柱效會(huì)有所下降。

2）對(duì)于普通毛細(xì)管，可采用軸向照射和多次反射來增加光路長度。

①軸向照射：將激光光束從毛細(xì)管末端沿管軸方向入射，在毛細(xì)管側(cè)面進(jìn)行檢測。

②多次反射：在毛細(xì)管壁鍍上銀，分別開入射窗和出射窗。當(dāng)入射光以特定角度入射后，在毛細(xì)管內(nèi)反射30～40次后從出射窗口射出。

二、激光誘導(dǎo)熒光檢測器：

激光誘導(dǎo)熒光檢測器采用激發(fā)光源使檢測物質(zhì)產(chǎn)生熒光進(jìn)行檢測。

檢測下限為10ˉ¹²～10ˉ¹⁰mol/L。

三、質(zhì)譜檢測器：

在CE－MS聯(lián)用中，毛細(xì)管區(qū)帶電泳最為常用。電子噴霧離子源可檢測多種高質(zhì)量的帶電分子，從CE分離出來的分子經(jīng)過接口后直接進(jìn)入MS，是MS首選的離子源。

檢測下限為10ˉ⁹～10ˉ⁷mol/L，通用性好，可獲得溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，但接口復(fù)雜。

四、電化學(xué)檢測器：

電化學(xué)檢測器可避免光學(xué)類檢測器遇到的光程太短的問題，是CE中最靈敏的檢測器之一。

1、電導(dǎo)檢測器：

柱上電導(dǎo)檢測是在毛細(xì)管壁上用激光鉆兩個(gè)孔，插上兩根鉑電極，再將孔封住進(jìn)行檢測。

檢測下限為10ˉ⁷～10ˉ⁵mol/L，通用性好，但需專門裝置和毛細(xì)管處理。

2、安培檢測器：

CE中微量樣品可使庫侖效率大大提高，可達(dá)40%以上，而在HPLC中很少超過10%。

檢測下限為10ˉ⁹～10ˉ⁸mol/L，靈敏度高，選擇性好，但僅適用于電活性物質(zhì)的檢測。

五、激光熱透鏡檢測器：

物質(zhì)受到光子幅射后產(chǎn)生與之相關(guān)的溫度場，引起密度、折射指數(shù)、應(yīng)力等各種光、熱和機(jī)械性能的變化（光熱效應(yīng)），對(duì)這些參數(shù)進(jìn)行測定可獲得物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)信息。

激光照到毛細(xì)管后，導(dǎo)致毛細(xì)管內(nèi)樣品受熱，溫度升高，不同的溫度形成折射指數(shù)的梯度分布，類似一光學(xué)透鏡，使另一束探測激光產(chǎn)生散焦或偏轉(zhuǎn)，測定此散焦或偏轉(zhuǎn)可進(jìn)行定量分析。

檢測下限為10ˉ⁸～10ˉ⁵mol/L。

六、激光誘導(dǎo)毛細(xì)管振動(dòng)檢測器：

激光照射到毛細(xì)管產(chǎn)生的光熱效應(yīng)誘導(dǎo)毛細(xì)管局部熱膨脹，發(fā)生彈性振動(dòng)，振幅正比于樣品的吸收，并能使另一探測激光產(chǎn)生偏轉(zhuǎn)。

檢測下限為10ˉ⁷mol/L。

七、拉曼光譜檢測器：

激光束聚焦到毛細(xì)管上，產(chǎn)生的散射光由一束圍繞著毛細(xì)管的光纖引導(dǎo)到拉曼光譜儀的接收器上，即構(gòu)成了拉曼光譜檢測器。

檢測下限為10ˉ⁷～10ˉ⁵mol/L，可獲得溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息。

八、化學(xué)發(fā)光檢測器：

化學(xué)發(fā)光檢測器靈敏度高，結(jié)構(gòu)簡單，近年來引起重視。

檢測下限為10ˉ⁹mol/L，適用于生物體系和臨床化學(xué)樣品的檢測。

九、示差折光檢測器：

示差折光檢測器的信號(hào)正比于樣品濃度的變化，而不是正比于樣品濃度本身。由于CE中形成的塞式流，使區(qū)帶邊界產(chǎn)生極大的濃度改變，可測定折射率的變化。

檢測下限為10ˉ⁷～10ˉ⁵mol/L，簡單易行，適用面廣。

十、同位素檢測器：

同位素檢測器選擇性高，靈敏度高。測定時(shí)需標(biāo)記同位素，檢測β或γ射線。

檢測下限為10ˉ⁹～10ˉ⁷mol/L。

   

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