高效毛細管等速電泳色譜儀(CITP)是采用先導電解質(zhì)和尾隨電解質(zhì),利用待測離子淌度的不同進行分離。
一、CITP條件:
1、特殊的電解質(zhì)系統(tǒng):
(1)前導電解質(zhì):淌度比樣品中任何離子的淌度都大并具有一定緩沖能力的離子。
(2)尾隨電解質(zhì):淌度比樣品中任何離子的淌度都小并具有一定緩沖能力的離子。
(3)對離子:以滿足系統(tǒng)電中性的要求。
CZE整個系統(tǒng)都充滿同一種電解質(zhì)(背景電解質(zhì)或支持電解質(zhì)),它起運載電流的作用,并具有一定緩沖能力。在CITP中,不加入這樣的背景電解質(zhì)。
2、背景電流要小到足以克服區(qū)帶電泳效應:
CITP要求溶劑的自身電導可忽略不計。由于沒有背景電解質(zhì)的背景電流,電滲流為零,各區(qū)帶相互連接。
二、工作原理:
采用兩種不同濃度的電解質(zhì)。一種為前導電解質(zhì),淌度比樣品中任何離子的淌度都大并具有一定緩沖能力,充滿整個毛細管,并加入到毛細管末端的電解槽中。另一種為尾隨電解質(zhì),淌度比樣品中任何離子的淌度都小并具有一定緩沖能力,加入到毛細管起始端的電解槽中。樣品加在先導電解質(zhì)和尾隨電解質(zhì)之間,系統(tǒng)中加入對離子以滿足電中性的要求。利用待測離子淌度的不同進行分離,達到平衡時,各離子區(qū)帶上電場強度的自調(diào)節(jié)作用使各離子區(qū)帶具有相同的遷移速度,逐漸形成各自獨立的區(qū)帶而達到分離。
不同離子的淌度不同,所形成區(qū)帶的電場強度不同,淌度大的離子區(qū)帶的電場強度小。沿出口到進口,將不同區(qū)帶依次排序為1、2、3…,電場強度依次增大。假設2號區(qū)帶中的離子擴散到3號區(qū)帶,3號區(qū)帶的電場強度大,離子被加速使之返回到2號區(qū)帶。假設2號區(qū)帶中的離子擴散到1號區(qū)帶,離子被減速使之返回到2號區(qū)帶。從而使各區(qū)帶形成鮮明的界面。
三、特點:
1、CITP在自由溶液中進行,一般用恒流操作模式。
2、屬于不連續(xù)介質(zhì)電泳,需要兩種電解質(zhì)。
3、具有自銳化效應,區(qū)帶界面明顯,有富集和濃縮作用。
4、空間分辨率差。
四、應用:
較早采用的分離模式,目前應用不多。
常用作柱前濃縮以富集樣品。
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