影響高效液相吸附柱色譜儀分離效果的主要因素有固定相的選擇、洗脫劑的選擇和被分離組分的性質(zhì)等。

一、固定相的選擇。

二、洗脫劑的選擇：

在高效液相吸附柱色譜中，用于沖洗加有樣品色譜柱的溶劑（單一溶劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱為洗脫劑。洗脫劑的選擇，對組分分離關(guān)系極大。

溶劑的洗脫能力，主要取決于溶劑的極性。溶劑的極性可根據(jù)其介電常數(shù)作大致判斷。洗脫劑的洗脫能力還與被分離物質(zhì)的極性和所選用的固定相性質(zhì)有密切關(guān)系。

溶劑的介電常數(shù)大小順序：水＞甲醇＞乙醇＞丙酮＞乙酸乙酯＞三氯甲烷＞二氯甲烷＞苯＞四氯化碳＞環(huán)己烷＞正庚烷 ＞正己烷（石油醚）。

常用溶劑的介電常數(shù)：己烷ε為1.88，苯ε為2.29，氯仿ε為5.20，乙酸乙酯ε為6.11，乙醇ε為26，甲醇ε為31.2，水ε為81。

為了尋找合適的洗脫劑，應(yīng)先作薄層或紙色譜試驗，找到合適的溶劑系統(tǒng)后，再應(yīng)用到高效液相吸附柱色譜中。如單一溶劑洗脫效果不好，可用混合溶劑，對成分復(fù)雜的混合物可用梯度洗脫。

三、被分離組分的性質(zhì)：

被分離物質(zhì)、固定相和洗脫劑三個要素彼此緊密相連，在指定的固定相與洗脫劑的條件下，各組分的分離情況直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。

常見官能團極性強弱順序為：R－COOH＞Ar－OH＞H－OH＞R－OH＞R－NH₂＞R－SH＞R－CHO＞R－CO－R＞R－COOR′＞R－N（CH₃）₂ ＞R－NO₂＞ROCH₃＞－CH = CH－＞－CH₂－CH₂－。

有機化合物極性強弱的大致判斷。如葡萄糖，因分子中含有許多－OH，故為極性化合物。如氨基酸，因分子中既有正電基團，又有負電基團，故極性很強。高級脂肪酸如硬脂酸C₁₇H₃₅COOH，雖含有羥基這樣的強極性官能團，但分子的主體由長鏈烴基組成，故極性依然很弱。

   

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