影響高效毛細(xì)管電泳色譜儀（CE）譜峰展寬的因素有進(jìn)樣、縱向擴(kuò)散、焦耳熱、吸附、電分散和層流等。

一、進(jìn)樣：

當(dāng)進(jìn)樣塞長度太大時(shí)，引起的譜峰展寬大于縱向擴(kuò)散，分離效率會(huì)明顯下降。

實(shí)際操作時(shí)，進(jìn)樣塞長度小于毛細(xì)管總長度的1%～2%。

二、縱向擴(kuò)散：

擴(kuò)散是物質(zhì)分子由高濃度區(qū)域自發(fā)遷移到低濃度區(qū)域的過程。

在理想的情況下，縱向擴(kuò)散是CE中導(dǎo)致譜峰展寬的唯一因素。根據(jù)色譜速率理論方程可知：

H = 2D/v_ap

式中：D為組分的擴(kuò)散系數(shù)。

若只考慮分子擴(kuò)散，則理論塔板數(shù)為：

n = L_ef/H

= L_efv_ap/（2D）

= μ_apEL_ef /（2D）

= μ_apVL_ef /（2DL）

式中：V為電壓，L為毛細(xì)管全長。

由上式可知，n與電場強(qiáng)度成正比，與組分的擴(kuò)散系數(shù)成反比。

在CE中，組分在幾萬至十幾萬伏的電壓下，遷移速度較快，縱向擴(kuò)散小，柱效高。大分子比小分子的擴(kuò)散系數(shù)小，可獲得更高的分離效率。

三、焦耳熱：

電流通過毛細(xì)管內(nèi)緩沖溶液時(shí)產(chǎn)生的自熱稱為焦耳熱。焦耳熱通過管壁向周圍環(huán)境散熱，管中心溫度最高，由中心向管壁逐漸下降。溫度高，粘度小，管中心組分的遷移速度最快，管壁附近組分的遷移速度最慢，破壞了溶質(zhì)區(qū)帶的扁平塞子流型，造成譜峰展寬。

大內(nèi)徑毛細(xì)電阻小，電流大，產(chǎn)生焦耳熱多，且不易散熱。小內(nèi)徑毛細(xì)管散熱面積大，溫度梯度小，譜峰展寬小。但內(nèi)徑過小會(huì)帶來進(jìn)樣和檢測等方面的困難，又易造成柱堵塞。因此，目前多采用內(nèi)徑為25～75μm的毛細(xì)管。

采用低淌度緩沖液如三羥甲基氨基甲烷（Tris）等，由于這種粒子的質(zhì)荷比很大，可減小電流。

采用溫度控制裝置，盡快除去熱量，使系統(tǒng)盡可能保持恒溫，是目前常采用的辦法。控溫方式有氣冷和液冷，一般條件下用氣冷可滿足要求。

四、吸附：

溶質(zhì)與毛細(xì)管壁之間存在吸附和疏水作用，會(huì)使遷移速度減慢，造成譜峰展寬。

1、造成管壁吸附的主要原因：

（1）陽離子溶質(zhì)和帶負(fù)電管壁的離子相互作用：

當(dāng)電解質(zhì)溶液pH＞3時(shí)，毛細(xì)管壁帶負(fù)電荷，因靜電引力，溶質(zhì)陽離子被管壁吸附。

（2）存在疏水相互作用：

蛋白質(zhì)和多肽帶電荷數(shù)多，疏水基較多，疏水作用較強(qiáng)，被極性水溶劑擠向管壁，是目前分離該類物質(zhì)的一大難題。在pH＜3時(shí)，管壁呈電中性時(shí)尤為明顯。

小內(nèi)徑毛細(xì)管有利于散熱，但比表面積大（柱內(nèi)表面積和柱體積之比），會(huì)使吸附增加，峰展寬大。

2、抑制或消除吸附的方法：

（1）加入兩性離子代替強(qiáng)電解質(zhì)：

兩性離子一端帶正電，另一端帶負(fù)電，帶正電一端與管壁負(fù)電中心作用，當(dāng)濃度約為溶質(zhì)的100～1000倍時(shí)，可抑制對(duì)蛋白質(zhì)的吸附，又不增加溶液的電導(dǎo)，對(duì)電滲流影響不大。

（2）采用極端pH條件：

在pH = 2～3或pH＞9的緩沖液中進(jìn)行CE分離，可抑制管壁硅醇基的離解或使待測組分帶負(fù)電，與管壁相斥，從而使吸附受到抑制。

（3）對(duì)管壁加以修飾。

五、電分散：

當(dāng)溶質(zhì)區(qū)帶與緩沖溶液區(qū)帶的電導(dǎo)不同時(shí)，會(huì)造成譜峰展寬。

應(yīng)盡量選擇與樣品淌度相匹配的背景電解質(zhì)溶液。

六、層流：

一般情況下，CE中不存在層流，但當(dāng)毛細(xì)管兩端存在壓力差時(shí)，會(huì)出現(xiàn)拋物線型的層流。

產(chǎn)生的原因是毛細(xì)管兩端液面高度不同。實(shí)際工作中，應(yīng)保持毛細(xì)管兩端緩沖溶液平面高度相同。

   

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