紫外可見吸收檢測器（UVD）是基于朗伯－比耳定律，根據(jù)被測組分對紫外光或可見光具有吸收，吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比的關(guān)系進(jìn)行檢測。UVD是高效液相色譜儀分析中應(yīng)用最廣泛的檢測器，對占物質(zhì)總數(shù)約80%的有紫外吸收的物質(zhì)均有影響，既可檢測190～350nm（紫外光區(qū)）的光吸收變化，也可向可見光范圍350～700nm延伸。高效液相色譜中約75%的檢測器是UVD，其中50%是多波長紫外可見吸收檢測器，25%是光電二極管陣列檢測器（PDAD）。

一、結(jié)構(gòu)：

UVD由光源、分光系統(tǒng)、樣品池和檢測系統(tǒng)等組成。

二、工作原理：

高效液相色譜流通池內(nèi)樣品的濃度與吸光度的關(guān)系遵循Lambert－Beer定律：

A = ㏒（I₀/I）=εbc

式中：A為吸光度，I₀為入射光強(qiáng)度，I為透射光強(qiáng)度，ε為樣品的摩爾吸光度，b為流通池的光程長度，c為樣品濃度。

UVD常用氘燈作光源，裝有一個光柵型單色器，有兩個流通池，一個是參考池，另一個是測量池。氘燈發(fā)射出紫外－可見區(qū)范圍的連續(xù)波長的光，波長選擇范圍為190～700nm。光線照射到全息凹面光柵上，衍射的單色光照射到半透射反光鏡上被分成兩束，一束經(jīng)測量池后照射到測量光電池上，另一束經(jīng)參考池后照射到參考光電池上。若兩個流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外光下幾乎無吸收，兩個光電池上接收到的輻射強(qiáng)度相等，即無信號輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測量池時，吸收一定的紫外光，使兩個光電池接收到的輻射強(qiáng)度不等，即有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度成正比。

三、檢測方式：

UVD檢測方式有直接紫外檢測、間接紫外檢測和柱后衍生化光度檢測等。

1、直接紫外檢測：

使用的流動相為在檢測波長下無紫外吸收的溶劑，檢測器直接測定被測組分的紫外吸收強(qiáng)度。

多數(shù)情況下采用直接紫外檢測。

2、間接紫外檢測：

使用具有紫外吸收的溶液作為流動相，間接檢測無紫外吸收的組分。

在離子色譜中使用較多，如以具有紫外吸收的鄰苯二甲酸氫鉀溶液作為陰離子分離的流動相，當(dāng)無紫外吸收的無機(jī)陰離子被洗脫到流動相中時，會使流動相的紫外吸收減小。

3、柱后衍生化光度檢測：

對于可與顯色劑反應(yīng)生成有色配合物的組分（過渡金屬離子和氨基酸等），可在被測組分從色譜柱中洗脫出來后與合適的顯色劑反應(yīng)，在可見光區(qū)檢測生成的有色配合物。

使用UVD檢測時，為了得到高的靈敏度，常選擇被測組分能產(chǎn)生最大吸收的波長作為檢測波長，但為了選擇性或其它目的也可適當(dāng)降低靈敏度而選擇吸收稍弱的波長。另外，應(yīng)盡可能選擇在檢測波長下沒有背景吸收的流動相。

四、類型：

1、按波長固定與可變可分：

（1）固定波長紫外可見吸收檢測器：

由低壓汞燈提供固定波長254nm或280nm的紫外光經(jīng)入射石英棱鏡準(zhǔn)直，再經(jīng)遮光板分為一對平行光束分別進(jìn)入流通池的測量臂和參考臂。經(jīng)流通池吸收后的出射光，經(jīng)過遮光板、出射石英棱鏡和紫外濾光片，只讓254nm的紫外光被雙光電池接收，光強(qiáng)度經(jīng)對數(shù)放大器轉(zhuǎn)化成吸光度后將信號輸出。

這類檢測器的波長不能調(diào)節(jié)，不能選擇在被測組分的最優(yōu)吸收波長下檢測，除有些制備型HPLC配置外，已基本淘汰。

（2）可變波長紫外可見吸收檢測器：

光源波長選擇可任意可調(diào)，應(yīng)用非常廣泛。

1）可選擇被測組分的最大吸收波長作為檢測波長，提高檢測靈敏度。

2）可選擇被測組分有強(qiáng)吸收而干擾無吸收的波長進(jìn)行檢測，提高分析選擇性。

3）梯度洗脫時，可選擇流動相改變而其吸光度不變的波長進(jìn)行檢測，有利于梯度洗脫。

4）可選擇的波長范圍很大，既提高檢測器的選擇性，又可選用被測組分的最靈敏吸收波長進(jìn)行檢測，提高檢測靈敏度。

5）具有有停流掃描功能，可繪出被測組分的光吸收譜圖，以進(jìn)行吸收波長的選擇。

可變波長型檢測器是當(dāng)前高效液相色譜配置最多的檢測器，其光學(xué)結(jié)構(gòu)與一般的紫外分光度計一致，主要區(qū)別是用流動池替代了比色池。由于光源是通過單色器分光后再照射到樣品上，照射光強(qiáng)度相應(yīng)減弱。因此，這類檢測器對檢測元件（光電轉(zhuǎn)換元件）和放大器要求較高。

2、按單波長與多波長可分：

（1）單波長式固定波長紫外可見吸收檢測器。

（2）多波長式固定波長紫外可見吸收檢測器。

3、按對可見光的檢測與否可分：

（1）可變波長紫外可見吸收檢測器。

（2）可變波長紫外吸收檢測器。

4、按波長掃描不同可分：

（1）不自動掃描紫外可見吸收檢測器。

（2）自動掃描紫外可見吸收檢測器。

（3）多波長快速掃描紫外可見吸收檢測器。

光電二極管陣列檢測器屬于多波長快速掃描紫外可見吸收檢測器，是高效液相色譜最有發(fā)展前景和最好的檢測器。

五、特點：

1、優(yōu)點：

（1）應(yīng)用廣泛。

（2）波長可選。

（3）靈敏度高。

（4）噪聲低。

（5）線性范圍寬。

（6）對流動相的溫度和流量變化不敏感。

（7）適用于梯度洗脫，可用于制備。

（8）必須使用無紫外吸收的溶劑作流動相。

（9）為選擇型檢測器。

（10）為濃度型檢測器。

（11）能與多種檢測器串聯(lián)使用。

（12）為非破壞性檢測器，可與制備色譜或其它設(shè)備串聯(lián)。

（13）結(jié)構(gòu)簡單，維護(hù)方便。

2、缺點：

（1）對紫外吸收差的化合物（如不含不飽和鍵的烴類等）靈敏度很低。

（2）紫外吸收大的溶劑不能做流動相。

每種溶劑都有截止波長，當(dāng)小于該截止波長的紫外光通過溶劑時，溶劑的透光率降至10%以下。因此，流動相的截止波長不能大于UVD的工作波長。用截止波長以上至少5～10nm作為工作波長。

高效液相色譜常用溶劑的紫外截止波長：

1）二硫化碳：380nm

2）氯仿：245nm

3）四氫呋喃：212nm

4）苯：210nm

5）乙腈：190nm

6）甲醇：205nm

7）水：187nm

（3）緩沖鹽、離子對試劑和胺改性劑也會有影響。

六、應(yīng)用：

對大部分有機(jī)物有響應(yīng)。

   

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