高效毛細(xì)管電色譜儀（CEC）填充毛細(xì)管柱是將固定相填充到毛細(xì)管中，通過(guò)兩端燒結(jié)柱塞將固定相保持在毛細(xì)管中而成。其最大優(yōu)點(diǎn)是可利用眾多的HPLC固定相，根據(jù)化合物與固定相的作用不同實(shí)現(xiàn)高效分離，在CEC中應(yīng)用最廣泛。

一、固定相：

固定相是影響填充毛細(xì)管柱分離選擇性、柱效和分離速度的重要因素，是發(fā)展新型CEC分離模式的基礎(chǔ)。

HPLC的各種固定相已被應(yīng)用于CEC中，其中十八烷基硅烷鍵合硅膠固定相（ODS）最多。由于CEC是以電滲流驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相，不存在柱壓降問(wèn)題，可采用粒徑很小的固定相，以提高柱效。實(shí)驗(yàn)表明，只要固定相顆粒粒徑≥0.5μm，電滲流速度與固定相顆粒大小和填充均勻程度無(wú)關(guān)，所以分離效率高，重復(fù)性好。

混合官能團(tuán)固定相是專(zhuān)門(mén)針對(duì)CEC研制的新型固定相，是在硅膠表面同時(shí)鍵合具有反相色譜性能的烷基官能團(tuán)和具有離子交換性質(zhì)的磺酸官能團(tuán)，在很寬的pH范圍內(nèi)都能保持良好的電滲流。

二、制備方法：

1、柱塞：

柱塞制備對(duì)填充毛細(xì)管柱非常關(guān)鍵。

（1）柱塞必須滿(mǎn)足的要求：

1）有足夠的機(jī)械強(qiáng)度，能承受填充時(shí)的高壓。

2）化學(xué)惰性，耐有機(jī)溶劑和寬pH值的緩沖液。

3）有合適的孔隙度，既不使流動(dòng)相受阻，又可防止固定相顆粒通過(guò)。

4）死體積小，避免峰展寬。

（2）柱塞制備方法：

柱塞制作方法很多，目前應(yīng)用較多的是水玻璃燒制法和填料直接燒制法。

2、填充毛細(xì)管柱：

填充毛細(xì)管柱的填充方法有高壓勻漿填充法、電動(dòng)填充法和超臨界CO₂法等。

（1）高壓勻漿填充法：

高壓勻漿填充法是填充毛細(xì)管柱最常用的制備方法。

填充過(guò)程一般包括燒結(jié)進(jìn)樣端柱塞、高壓填充、燒結(jié)出口端柱塞、除去不需要的固定相和檢測(cè)窗口制作等步驟。

高壓勻漿填充法簡(jiǎn)單，快速，但操作技術(shù)要求較高。由于在分離樣品時(shí)施加電場(chǎng)，會(huì)使表面帶電荷的固定相沿某一方向電泳，容易造成柱局部過(guò)于緊密產(chǎn)生較大的壓力，而局部由于固定相遷移形成較大的空隙。

（2）電動(dòng)填充法：

電動(dòng)填充是利用電泳原理，使固定相在一定pH下帶電荷，在電場(chǎng)中定向移動(dòng)而把固定相填充到毛細(xì)管中。與高壓勻漿填充法相比，電動(dòng)填充法可有選擇地把荷質(zhì)比相同的固定相填入毛細(xì)管中，柱床均勻。

（3）超臨界CO₂法：

超臨界CO₂法是在毛細(xì)管柱一端制作臨時(shí)柱塞后，另一端與貯液罐相連，將預(yù)填充的填料放入貯液罐中，然后利用超臨界CO₂將填料填入毛細(xì)管中，再緩慢釋放壓力至常壓而得到干的色譜柱。柱使用前用流動(dòng)相潤(rùn)洗，平衡。

三、特點(diǎn)：

1、優(yōu)點(diǎn)：

（1）柱效高。

（2）固定相資源豐富。

2、缺點(diǎn)：

（1）存在柱塞制備和柱填充，步驟繁瑣。

（2）重現(xiàn)性差。

四、氣泡問(wèn)題：

填充毛細(xì)管柱CEC操作的困難是分離過(guò)程中常伴有氣泡產(chǎn)生。氣泡一般產(chǎn)生在柱塞與固定相交界處和柱塞與檢測(cè)窗交界處。為了控制氣泡產(chǎn)生，目前主要采取以下措施：

1、在柱兩端同時(shí)施加低壓，可較好的解決氣泡問(wèn)題。

2、制備滲透性好的柱塞。

3、在分流閥處接一阻尼管，當(dāng)電極處有氣泡產(chǎn)生時(shí)，氣泡會(huì)經(jīng)分流閥通過(guò)阻尼管排出。

4、利用超聲波使流動(dòng)相和樣品充分脫氣。

   

來(lái)源：http://www.fudizao.com