高效毛細(xì)管電泳色譜儀(CE)是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場為驅(qū)動力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離,是分析科學(xué)繼高效液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展,使分析科學(xué)從微升級進(jìn)入到了納升級水平,不僅使單細(xì)胞乃至單分子分析成為可能,也使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子分析有了新的轉(zhuǎn)機(jī)。
由于CE溶質(zhì)區(qū)帶的超小體積特性導(dǎo)致光程太短,圓柱形毛細(xì)管作為光學(xué)表面不夠理想,對檢測器靈敏度要求相當(dāng)高,可通過在線樣品富集技術(shù)提高檢測器靈敏度。常用在線樣品富集技術(shù)有色譜富集和場放大樣品堆積。
一、色譜富集:
對于濃度小的樣品溶液,引入到毛細(xì)管柱后,由于固定相本身的吸附作用,樣品會吸附在固定相上而實(shí)現(xiàn)富集。如果用洗脫能力較弱的緩沖液配制樣品,進(jìn)樣后樣品將保留在毛細(xì)管柱上,然后用洗脫能力強(qiáng)的流動相洗脫,則樣品會被壓縮為一條很窄的樣品區(qū)帶,柱效會大大提高。
二、場放大樣品堆積:
對于帶電荷的樣品,將樣品溶解在低電導(dǎo)的溶液中,使樣品溶液在高電導(dǎo)緩沖液中運(yùn)行。以電動進(jìn)樣方式進(jìn)樣后,樣品區(qū)帶電阻大,電場強(qiáng)度比較高,樣品離子會迅速移動穿越低電導(dǎo)區(qū),在到達(dá)低電導(dǎo)區(qū)和高電導(dǎo)區(qū)交接處時(shí),遷移速度迅速降低,形成一條窄的樣品區(qū)帶,而實(shí)現(xiàn)富集目的。
利用色譜富集和場放大樣品堆積對樣品進(jìn)行在線富集,雖然重現(xiàn)性有所降低,但檢測靈敏度提高約20~100倍。
來源:http://www.fudizao.com