制備型液相色譜儀的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)。為了縮短分離時間和提高分離效率，制備型液相色譜的的進樣品量很大，導致色譜柱的分離負荷相應加大，因此必須加大色譜柱填料，增大柱內(nèi)徑和柱長，使用的流動相相對增多。然而，當色譜柱上的樣品負載加大時，往往會導致柱效急劇下降而得不到純產(chǎn)品。制備型液相色譜要解決容量與柱效之間的矛盾，對重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟上來說，要少用填料，少用溶劑，盡可能多的得到產(chǎn)品。

一、樣品的前處理：

制備型液相色譜柱分離的樣品多，比分析型液相色譜柱更容易受污染，樣品前處理非常必要。

二、三氟乙酸（TFA）在緩沖液中的作用：

1、TFA起到類似離子對的作用，一般濃度在0.05%～0.1%。濃度過高會使溶液偏酸，長時間使用可能影響色譜柱壽命。

2、TFA可抑制硅膠表面的硅醇基，改善堿性化合物的峰形。若0.1%TFA分離不好，可加大濃度到0.2%，但用完后要及時沖洗色譜柱。

3、走梯度時走成基線漂移，但對制備影響不大。

三、降低柱壓的方法：

采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。

四、提高檢測下限的方法：

1、如果是等度洗脫，一定要改成單元等度。

2、盡量采用乙腈－水系統(tǒng)洗脫。乙腈紫外吸收小，相同條件下噪音小。

五、用水要求：

不含金屬離子和細菌。

六、分析方法開發(fā)中流動相的調(diào)整原則：

1、由強到弱：

一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進行試驗，可很快得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。

2、三倍規(guī)則：

每減少10%的有機溶劑（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規(guī)則。調(diào)整時注意觀察各個峰的分離情況。

3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：

當分離達到一定程度時，應將有機溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。

   

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