高效毛細(xì)管電泳色譜儀（CE）分析的樣品預(yù)濃縮方法有堆積進(jìn)樣、電場(chǎng)聚焦進(jìn)樣、等速電泳進(jìn)樣、固相萃取、液液分配色譜、中空纖維液相微萃取、吸附色譜和親和色譜等。

一、堆積進(jìn)樣：

1、原理：

根據(jù)樣品塞子與CE緩沖液的導(dǎo)電性差異來(lái)實(shí)現(xiàn)。若樣品的導(dǎo)電性小于CE緩沖液，樣品塞子上的電場(chǎng)強(qiáng)度高于緩沖液，樣品塞子中離子的遷移速度大于緩沖液。若樣品以?shī)A心餅干方式進(jìn)行CE電泳，則樣品在緩沖液中聚焦?jié)饪s。

2、特點(diǎn)：

可顯著增加樣品的輸出信號(hào)，約達(dá)20倍。

二、電場(chǎng)聚焦進(jìn)樣：

1、原理：

電場(chǎng)聚焦進(jìn)樣類似于樣品堆積進(jìn)樣，也是根據(jù)樣品與CE緩沖液的遷移速度差異來(lái)實(shí)現(xiàn)，差別是進(jìn)樣步驟和聚焦過(guò)程。電場(chǎng)聚焦進(jìn)樣是在整個(gè)進(jìn)樣過(guò)程都施加電壓，聚焦發(fā)生在用緩沖液瓶更換為樣品瓶直到CE電泳開(kāi)始的一段時(shí)間。即電場(chǎng)聚焦進(jìn)樣是根據(jù)樣品的遷移速度與電場(chǎng)強(qiáng)度成正比的特點(diǎn)，在CE電泳初期，使樣品從高電場(chǎng)突然轉(zhuǎn)入低電場(chǎng)，因減速而堆積在電場(chǎng)交界處，使區(qū)帶變窄，濃度提高，而達(dá)到聚焦?jié)饪s的目的。

2、特點(diǎn)：

可突破樣品堆積進(jìn)樣70%毛細(xì)管體積的進(jìn)樣量限制，使樣品濃縮約100倍，但有進(jìn)樣歧視現(xiàn)象。

三、等速電泳進(jìn)樣：

等速電泳進(jìn)樣既是CE的一種電泳模式，又可作為預(yù)濃縮的一種方法。采用等速電泳進(jìn)樣進(jìn)行樣品預(yù)濃縮有耦合毛細(xì)管等速進(jìn)樣和瞬時(shí)毛細(xì)管等速進(jìn)樣兩種模式。

1、耦合毛細(xì)管等速進(jìn)樣：

（1）原理：

將兩根毛細(xì)管相連接，一根用作等速電泳（ITP），另一根用作CE電泳。

（2）特點(diǎn)：

僅適用于水溶性樣品且裝置復(fù)雜，不常用。

2、瞬時(shí)毛細(xì)管等速進(jìn)樣：

（1）原理：

用一根毛細(xì)管既作ITP電泳，又作CE電泳。

第一步，將樣品溶解在前導(dǎo)電解質(zhì)（通常是氨溶液）中，以壓力進(jìn)樣方式將樣品導(dǎo)入CE毛細(xì)管中。然后將毛細(xì)管插入尾隨電解質(zhì)瓶（通常為醋酸）中，在毛細(xì)管兩端施加約30kV電壓，使前導(dǎo)電解質(zhì)、樣品和尾隨電解質(zhì)向陰極移動(dòng)，由于淌度差異，樣品被聚焦在前導(dǎo)電解質(zhì)和和尾隨電解質(zhì)之間。

第二步，用前導(dǎo)電解質(zhì)作為背景電解質(zhì)進(jìn)行CE電泳。

（2）特點(diǎn)：

對(duì)蛋白質(zhì)和多肽均可進(jìn)行分析，極具發(fā)展前景。

四、固相萃取：

1、原理：

固相萃取常用C₂、C₈和C₁₈作吸附劑，萃取床連接在轉(zhuǎn)移毛細(xì)管和CE之間。樣品通過(guò)轉(zhuǎn)移毛細(xì)管進(jìn)入萃取床，用電泳緩沖液沖洗樣品，隨后注入50～100nL有機(jī)修飾劑塞子使樣品洗脫進(jìn)入CE。有機(jī)修飾劑可引起樣品堆積。

2、特點(diǎn)：

可顯著降低檢測(cè)下限，但會(huì)使分離度降低，譜帶展寬，峰拖尾。

五、液液分配色譜：

1、根據(jù)液液分配色譜和電泳進(jìn)行濃縮：

（1）步驟：

第一步，將樣品溶解在非極性溶劑（如乙酸乙酯）中，以電動(dòng)進(jìn)樣方式將樣品導(dǎo)入CE毛細(xì)管中。同時(shí)，由于液體對(duì)流作用，可避免大量乙酸乙酯進(jìn)入毛細(xì)管中。

第二步，將毛細(xì)管插入尾隨電解質(zhì)瓶中，在電場(chǎng)作用下開(kāi)始聚焦。

第三步，達(dá)到穩(wěn)態(tài)后，將毛細(xì)管插入前導(dǎo)電解質(zhì)瓶中進(jìn)行CE電泳。

（2）特點(diǎn)：

此法濃縮能力高達(dá)1000倍，但蛋白質(zhì)易變性，在非極性相中易沉淀。

2、用一張浸有非極性溶劑（如十一碳烷）的聚丙烯膜將預(yù)濃縮室隔成兩個(gè)部分：一部分是供相，作為樣品進(jìn)入相；另一部分是受相，作為富集相。兩相均為水溶性。通過(guò)調(diào)節(jié)兩相pH，使樣品在供相中不帶電荷，進(jìn)入受相則帶電荷，從而達(dá)到濃縮目的。

六、中空纖維液相微萃取：

1、原理：

利用中空纖維壁能選擇性阻止一定分子量的物質(zhì)通過(guò)的特性而達(dá)到濃縮目的。

將中空纖維通過(guò)Teflon管與CE毛細(xì)管相連接，以電動(dòng)方式進(jìn)樣，由于蛋白質(zhì)不能透過(guò)中空纖維壁而聚集在毛細(xì)管入口端。濃縮完成后，關(guān)閉進(jìn)樣電場(chǎng)，接通分離電場(chǎng)進(jìn)行CE電泳。

2、特點(diǎn)：

此法速度快，濃縮效率高，可除掉一些小分子物質(zhì)（如鹽類），對(duì)痕量蛋白質(zhì)的檢測(cè)十分有效。

七、吸附色譜：

1、原理：

在CE毛細(xì)管進(jìn)樣端填充一小段吸附色譜填料或涂布一層色譜固定液，使樣品吸附濃集，再進(jìn)行CE電泳。

2、特點(diǎn)：

此法可提高檢測(cè)靈敏度近百倍，但進(jìn)樣時(shí)間長(zhǎng)。

八、親和色譜：

1、原理：

將親和色譜柱與CE毛細(xì)管相連接，以壓力方式進(jìn)樣，然后根據(jù)樣品性質(zhì)，以小體積的有機(jī)溶劑或特殊緩沖液進(jìn)行洗脫，進(jìn)入CE。

2、特點(diǎn)：

此法進(jìn)樣量可達(dá)50μL，濃縮高達(dá)100～500倍，可有效地降低檢測(cè)下限。

   

來(lái)源：http://www.fudizao.com