高效離子交換色譜儀的操作使用包括離子交換劑的選擇與處理、色譜柱的選擇、裝柱、平衡緩沖液的選擇、上樣、洗脫、檢測(cè)、分離后樣品的濃縮與脫鹽、離子交換劑的再生與轉(zhuǎn)型等。

一、離子交換劑的選擇：

1、確定是用陽(yáng)離子交換劑，還是陰離子交換劑。

2、選擇離子交換劑的基質(zhì)。

二、離子交換劑的處理：

處理流程：充分溶脹，除去雜質(zhì)和細(xì)小顆粒，用酸堿分別浸泡水洗至中性，排除氣泡。

陽(yáng)離子交換樹(shù)脂一般為Na型，陰離子交換樹(shù)脂一般為Cl型。處理時(shí)，一般情況下，陽(yáng)離子交換樹(shù)脂最后用NaOH處理，陰離子交換樹(shù)脂最后用HCl處理，使用的酸堿濃度一般小于2M，浸泡時(shí)間一般為30min。

三、色譜柱的選擇：

離子交換色譜柱通常粗短，直徑和長(zhǎng)度比一般為1：10～1：50。

四、裝柱：

1、色譜柱安裝要垂直。

2、裝柱時(shí)要均勻平整，不能有氣泡。

五、平衡緩沖液的選擇：

平衡緩沖液是指裝柱后和上樣后用于平衡離子交換色譜柱的緩沖液。

平衡緩沖液的離子強(qiáng)度和pH值要保證各個(gè)待分離物質(zhì)的穩(wěn)定，要使各個(gè)待分離物質(zhì)與離子交換劑有適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合，并盡量使待分離物質(zhì)和雜質(zhì)與離子交換劑的結(jié)合有較大的差別。

六、上樣：

上樣方式有正上柱和反上柱。

上樣時(shí)注意樣品液的離子強(qiáng)度和pH值，上樣量應(yīng)小于工作交換量。

七、洗脫：

1、洗脫液的選擇：

（1）保證所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都是穩(wěn)定的。

（2）要使結(jié)合在離子交換劑上的所有組分在洗脫液梯度范圍內(nèi)都能夠被洗脫。

（3）梯度范圍盡量小一些，以提高分辨率。

2、洗脫方式：

離子交換色譜一般采用梯度洗脫，通常有改變離子強(qiáng)度和改變pH值兩種洗脫方式。

（1）改變離子強(qiáng)度的洗脫：

在洗脫過(guò)程中逐步增大離子強(qiáng)度，從而使與離子交換劑結(jié)合的各個(gè)組分被洗脫下來(lái)。

（2）改變pH值的洗脫：

陽(yáng)離子交換劑一般是pH值從低到高洗脫，陰離子交換劑一般是pH值從高到低洗脫。

由于pH值可能對(duì)蛋白的穩(wěn)定性有較大的影響，一般采用改變離子強(qiáng)度進(jìn)行洗脫。

3、洗脫速度：

洗脫液的流速會(huì)影響離子交換分離效果，洗脫速度通常要保持恒定。

一般來(lái)說(shuō)，洗脫速度慢比快的分辨率要好，但過(guò)慢會(huì)造成分離時(shí)間長(zhǎng)、樣品擴(kuò)散、譜峰變寬和分辨率降低等。

如果洗脫峰相對(duì)集中于某個(gè)區(qū)域造成重疊，應(yīng)適當(dāng)縮小梯度范圍或降低洗脫速度來(lái)提高分辨率。

如果分辨率較好，但洗脫峰過(guò)寬，可適當(dāng)提高洗脫速度。

八、檢測(cè)：

檢測(cè)器檢測(cè)。

九、分離后樣品的濃縮與脫鹽：

經(jīng)離子交換分離后得到的樣品往往鹽濃度較高，體積較大，樣品濃度較低，所以分離后樣品一般要進(jìn)行濃縮與脫鹽處理。

十、離子交換劑的再生與轉(zhuǎn)型：

1、離子交換劑的再生：指對(duì)使用過(guò)的離子交換劑進(jìn)行處理，使其恢復(fù)原來(lái)性狀的過(guò)程。

2、離子交換劑的轉(zhuǎn)型：指離子交換劑由一種平衡離子轉(zhuǎn)為另一種平衡離子的過(guò)程。

   

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