高效液相色譜儀的化學(xué)鍵合固定相是將有機官能團通過化學(xué)反應(yīng)共價鍵合到硅膠表面的游離羥基上而形成的固定相，其突出特點是耐溶劑沖洗，可以通過改變鍵合相有機官能團的類型來改變分離選擇性。

一、鍵合相性質(zhì)：

目前，鍵合相廣泛采用微粒多孔硅膠為基質(zhì)，用烷烴二甲基氯硅烷或烷氧基硅烷與硅膠表面的游離硅醇基反應(yīng)形成Si－O－Si－C鍵型的單分子膜而制成。硅膠表面的硅醇基密度約為5個/nm²，由于空間位阻效應(yīng)，不可能將較大的有機官能團鍵合到全部硅醇基上，及其它因素的影響，使得約有40%～50%的硅醇基未反應(yīng)。

殘余的硅醇基對鍵合相的性能影響很大，特別是對非極性鍵合相，可以減小鍵合相表面的疏水性，對極性溶質(zhì)（特別是堿性化合物）會產(chǎn)生次級化學(xué)吸附，使溶質(zhì)在兩相之間的平衡速度減慢，降低鍵合相的穩(wěn)定性，使堿性組分的峰形拖尾，從而使保留復(fù)雜化。為盡量減少殘余醇基，一般在鍵合反應(yīng)后用三甲基氯硅烷（TMCS）等進行鈍化處理（稱為封端、封尾或封頂），以提高鍵合相的穩(wěn)定性。另一方面，有些ODS填料是不封尾的，以使其與水系流動相有更好的濕潤性能。

由于不同生產(chǎn)廠家所用的硅膠、硅烷化試劑和反應(yīng)條件不同，具有相同鍵合基團的鍵合相表面有機官能團的鍵合量往往差別很大，性能往差別很大。鍵合相的鍵合量常用含碳量（C%）或覆蓋度表示。所謂覆蓋度是指參與反應(yīng)的硅醇基數(shù)目占硅膠表面硅醇基總數(shù)的比例。

pH值對以硅膠為基質(zhì)的鍵合相的穩(wěn)定性影響很大。一般來說，硅膠鍵合相應(yīng)在pH = 2～8的介質(zhì)中使用。

二、鍵合相種類：

鍵合相按鍵合官能團的極性可分為極性鍵合相和非極性鍵合相。

1、極性鍵合相：

常用的極性鍵合相有氰基鍵合相（－CN）、氨基鍵合相（－NH₂）和二醇基鍵合相等。

極性鍵合相常用作正相色譜，樣品在極性鍵合相上的分離主要是基于極性鍵合基團與溶質(zhì)分子之間的氫鍵作用，極性強的組分保留值較大。極性鍵合相有時也可作反相色譜的固定相。

2、非極性鍵合相：

常用的非極性鍵合相有烷基鍵合相（C₁～C₁₈）、苯基鍵合相和苯甲基鍵合相等，其中C₁₈鍵合相應(yīng)用最廣。

非極性鍵合相的烷基鏈長對樣品容量、溶質(zhì)保留值和分離選擇性都有影響。一般來說，樣品容量隨烷基鏈長增加而增大，長鏈烷基可使溶質(zhì)保留值增大，常常可改善分離選擇性。短鏈烷基鍵合相具有較高的覆蓋度，分離極性化合物時可得到對稱性較好的色譜峰。

苯基鍵合相與短鏈烷基鍵合相的性質(zhì)相似。

C₁₈鍵合相的穩(wěn)定性較高。這是由于長的烷基鏈對硅膠基質(zhì)有保護作用，但C₁₈基團空間體積較大，使有效孔徑變小，分離大分子化合物時柱效較低。

三、固定相選擇：

1、分離中等極性和極性較強的化合物，可選擇極性鍵合相。

氰基鍵合相對雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等的環(huán)狀化合物的分離有較好的選擇性。

氨基鍵合相具有較強的氫鍵結(jié)合能力，對某些多官能團化合物如甾體和強心甙等有較好的分離能力。氨基鍵合相上的氨基能與糖類分子中的羥基產(chǎn)生選擇性相互作用，被廣泛用于糖類的分離，但不能用于羰基化合物如甾酮和還原糖等分離，因為它們之間會發(fā)生反應(yīng)生成Schiff堿。

二醇基鍵合相適用于有機酸、甾體和蛋白質(zhì)的分離。

2、分離非極性和極性較弱的化合物，可選擇非極性鍵合相。

利用特殊的反相色譜技術(shù)如反相離子抑制和反相離子對色譜等，非極性鍵合相也可以分離離子型或可離子化的化合物。

C₁₈是應(yīng)用最為廣泛的非極性鍵合相，對各種類型的化合物都有很強的適應(yīng)能力。

短鏈烷基鍵合相適用于極性化合物的分離。

苯基鍵合相適用于芳香化合物的分離。

   

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